人靜脈內(nèi)皮細胞(HUV-EC)介紹：人靜脈內(nèi)皮細胞(HUV-EC)來源于人靜脈內(nèi)皮，可在半固體培養(yǎng)基中形成克隆，在免疫抑制小鼠中不能形成腫瘤。

人靜脈內(nèi)皮細胞(HUV-EC)特性：

1） 來源：人靜脈內(nèi)皮

2） 形態(tài)：內(nèi)皮細胞

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運輸和保存：

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80 度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。收到細胞后請拍照，3 天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。

人靜脈內(nèi)皮細胞(HUV-EC)用途：僅供科研使用。

人靜脈內(nèi)皮細胞(HUV-EC)接收后的處理：

1）收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

2）請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，酒精消毒瓶壁并將T25 瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3）棄去T25 瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml 明舟生物（mingzhoubio）附帶的完全培養(yǎng)基。

4）如果細胞長滿80%-90%請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用明舟生物（mingzhoubio）附帶的完全培養(yǎng)基。

細胞培養(yǎng)步驟

一．人靜脈內(nèi)皮細胞(HUV-EC)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備F-12K 培養(yǎng)基(F-12K:SIGMA,貨號N3520, 添加0.1 mg/ml 肝素; 0.03-0.05mg/ml 內(nèi)皮細胞生長因子)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL 細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?span lang="EN-US">細胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

下面T25 瓶為例；

1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗瓶底1-2 次后加入1ml 胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml 完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2．1000rpm 離心分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO 至最終濃度為10%。加入DMSO 后迅速混勻，按每1ml 的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物（mingzhoubio）按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106 個細胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，至少2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項：

1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。