人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT 116)是1979 年M.Brattain 等從患結(jié)腸癌的男性病人中分離的三株惡性細(xì)胞之一。在半固體瓊脂糖培養(yǎng)基中形成克隆。人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT 116)在無胸腺的裸鼠有致瘤性,形成上皮樣的腫瘤。
1) 來源:結(jié)直腸癌
2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣
3) 含量:>1x106 個(gè)/mL
4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5) 規(guī)格:T25 瓶或者1mL 凍存管包裝
運(yùn)輸和保存:可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:
(1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;
(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
細(xì)胞用途:僅供科研使用。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT 116)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備McCoy’s 5A 培養(yǎng)基(McCoy’s 5A,GIBCO,貨號(hào)16600-082);北美胎牛血
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37 攝氏度,培養(yǎng)箱
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞1-2 次。
2. 加2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM 條件下離心4 分
4. 將細(xì)胞懸液按1:2 到1:5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25 瓶為例;
1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗瓶底1-2 次后加入1ml 胰酶,細(xì)
2.1000RPM 離心5 分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO 至最終濃度為
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,至少2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液
注意事項(xiàng):
1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。